pcr實驗室 pcr實驗室是什么？

pcr實驗室又叫基因擴增實驗室。pcr是聚合酶鏈式反應(yīng)(polymerase chain reaction)的簡稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的dna片段，可看作生物體外的特殊dna復(fù)制。通過dna基因追蹤系統(tǒng)，能迅速掌握患者體內(nèi)的病毒含量，其精確度高達納米級別。 pcr實驗室分區(qū) 目前pcr實驗室建設(shè)要求至少應(yīng)該分為三個區(qū)域，即試劑準備區(qū)、核酸制備區(qū)和pcr擴增區(qū)，如果要對擴增產(chǎn)物進行開放性鑒定，如雜交、電泳等操作，原則需要增加第四個區(qū)。實驗室分區(qū)的主要目的是避免純化核酸和擴增產(chǎn)物逆向污染前一個區(qū)域，但多年的經(jīng)驗表明，無論是三區(qū)還是四區(qū)的設(shè)置，似乎都沒有完全杜絕實驗室污染的發(fā)生。 標準的pcr實驗室設(shè)計規(guī)范應(yīng)包含以下幾個部分：

1 、pcr實驗室平面布局pcr實驗室裝修必須是單向走廊嗎？ pcr擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域：試劑貯存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染，進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向進行，即只能從試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)。 各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過傳遞窗進行。

2、標準的三區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié) 將 pcr 過程分成試劑準備、標本制備和 pcr 擴增檢測三個獨立的實驗區(qū)，整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū)， 通過氣壓調(diào)節(jié)，使整個 pcr 實驗過程中，試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。

3、pcr實驗室擴增反應(yīng)混合物配置和擴增區(qū) pcr實驗室可以是分散形式，也可以是組合形式。完成一組pcr實驗，通常應(yīng)經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴增及產(chǎn)物分析四個實驗過程，若實驗工藝需要，還應(yīng)增加樣品粉碎過程。

分析我國大多pcr實驗室的檢測項目不難發(fā)現(xiàn)，近80%的實驗室采用熒光pcr試劑盒進行臨床檢測，即這部分實驗室不存在開放性核酸鑒定環(huán)節(jié)，試劑工作液的配制多在核酸制備完成后進行，依存“試劑配置與pcr擴增之間的時間越短越好”的原則，多數(shù)實驗室的試劑配制均在核酸制備室完成，也就是說，試劑配制室的存在基本被忽視，了解了羅氏cobas的操作方式，這種做法便顯得無可厚非！ 核酸制備完成并加入pcr反應(yīng)液后，移管到擴增室，由于采用封閉核酸鑒定的方法，這樣擴增室的設(shè)置也同樣顯得多余！以羅氏cobas為鏡，臨床pcr實驗室是否分區(qū)便顯得無足輕重了！但這并不是說pcr實驗室不需要分區(qū)，因為儀器自動化控制的機械臂，與實驗室操作人員的操作習(xí)慣和對規(guī)則的執(zhí)行力是有著本質(zhì)差別的！這或許就是經(jīng)過嚴格分區(qū)后的實驗室，污染同樣存在的主要原因！ 那么pcr實驗室究竟應(yīng)如何建設(shè)才能有利于污染的預(yù)防和有效清除？ 其實污染就是pcr擴增管中摻入了原來樣本不存在的擴增核酸，那么這個不受歡迎的核酸是怎么來到pcr擴增管里的？如果排除試劑盒、儀器和人員操作等環(huán)節(jié)，核酸氣溶膠和灑落的樣本與核酸的清除是實驗室建設(shè)應(yīng)該重點考慮的環(huán)節(jié)。

實驗室的建設(shè)首先要有通風(fēng)設(shè)置，通風(fēng)是pcr實驗室建設(shè)應(yīng)該考慮的基本條件，如果采用封閉彩鋼板建設(shè)的實驗室，應(yīng)進行壓差設(shè)置，即自試劑準備室、核酸制備室到擴增室依次呈負壓，但清潔新風(fēng)應(yīng)從室外引進，新風(fēng)過濾網(wǎng)應(yīng)定期更換，否則便成為污染的來源。其次是實驗室墻面和地面具有防水功能，也就是墻面和地面可以水洗！ 每個房間設(shè)置地漏，方便“實驗室的清潔”，當(dāng)實驗室污染發(fā)生時，即可使用“水洗實驗室”的方法有效清除污染，清除過程使用的是0.2%有效氯溶液，它不但有效斷裂核酸片段，而且還具有淬滅熒光基團，有利于pcr實驗室熒光本底的去除。但過量使用反而會影響試劑擴增效率。消毒液清洗后應(yīng)該使用自來水或清潔水進行再次清洗，特別是設(shè)備表面。實驗室空氣中的污染清除，可以用有效氯溶液進行噴霧。

總之，pcr實驗室過度分區(qū)和分割，不但浪費空間，影響人員操作，常常不利于污染物的擴散和清除，相信在不久的將來，隨著試劑盒技術(shù)的發(fā)展，一個房間可實現(xiàn)pcr的試劑準備、核酸純化和pcr擴增的所有功能，而污染的預(yù)防和清除也會顯得十分簡單。